Publicado: 2023 | Última revisión: mayo de 2026

Revitalización de células tras la criopreservación

Las células, los tejidos e incluso algunas especies pueden almacenarse durante un período prolongado y luego recuperarse para su estudio posterior. Este artículo analiza los diversos procedimientos utilizados para descongelar células criopreservadas y ofrece orientación para reactivarlas y garantizar su viabilidad. Sin embargo, es importante seguir al pie de la letra las instrucciones proporcionadas por su proveedor de cultivos celulares.

Puntos clave

• La descongelación de células es un paso crucial en el proceso de criopreservación, que implica el calentamiento gradual de las células congeladas hasta la temperatura ambiente.
• Para descongelar células cancerosas y células madre, se recomienda descongelar los viales lentamente, ya que esto reduce el riesgo de daño celular.
• Durante la descongelación, la velocidad de descongelación, la temperatura y la exposición al crioprotector son factores que pueden causar daño celular.
• Para reactivar las células es necesario proporcionarles los nutrientes y minerales que necesitan para crecer.
• Después de reactivar las células y antes de utilizarlas en experimentos, es necesario verificar si presentan daño y evaluar su viabilidad, así como monitorear su crecimiento y proliferación.
• Para garantizar el éxito de la descongelación y reactivación de las células, es esencial seguir las pautas y protocolos recomendados, manipular las células con cuidado y mantener registros precisos.

Protocolo de descongelación

1. Descongele rápidamente las células en un baño de agua a 37 °C durante 1 a 2 minutos hasta que solo quede un pequeño trozo de hielo en el criotubo.
   • A partir de este momento, todos los procedimientos deben realizarse en condiciones asépticas.
2. Transfiera el criovial a una cabina de flujo estéril desinfectada.
3. Abra con cuidado el vial y utilice una pipeta serológica de 2 mL para determinar el número total de células midiendo el volumen total de la solución celular. A continuación, extraiga 20 µL de células para contarlas como una alícuota.
4. Coloca la suspensión celular en un tubo de centrífuga de 15 ml que contenga 8 ml de medio de cultivo (a temperatura ambiente).
5. Suspende las células con cuidado.
6. Centrifugue durante 3 minutos a 300 x g y deseche el sobrenadante.
   • Se puede omitir el paso de centrifugación y colocar las células directamente en un frasco de cultivo celular, pero asegúrese de cambiar el medio 24 horas después.
7. Coloca las células inmediatamente en 10 ml de medio de cultivo fresco (precalentado a temperatura ambiente o a 37 °C en una incubadora) para proporcionarles nutrientes para el crecimiento y diluir el crioprotector, como el DMSO. Como crioprotector, el DMSO protege a las células del daño causado por la congelación al impedir la formación de cristales de hielo, pero puede ser tóxico para las células en concentraciones elevadas. Se deben llenar dos frascos de cultivo celular T25 con células.
8. Coloca las células en una incubadora y cambia el medio al día siguiente.
9. Continúe incubando las células revitalizadas según las instrucciones específicas para esta línea celular en particular.
10. Antes de realizar tus experimentos, deja que las células descongeladas se recuperen en el medio de cultivo para que puedan recuperarse del estrés causado por la descongelación. Además, verifica si las células presentan daños y evalúa su viabilidad mediante observación microscópica o realizando una prueba de viabilidad, y monitorea el crecimiento de las células.

Nota: ¡No olvides consultar y ajustar la temperatura de incubación y el nivel de CO_₂ adecuados para tus células! La mayoría de las células se incuban a 37 °C, pero algunas células de insectos, por ejemplo, requieren temperaturas más bajas.

¿Por qué la descongelación es estresante para las células?

El proceso de descongelación expone a las células a cambios ambientales potencialmente dañinos, como se describe a continuación:

• Cambios de temperatura: Las células pueden sufrir daños durante la transición de temperaturas criogénicas a temperaturas más cálidas. El choque térmico durante la descongelación puede dañar las membranas, las enzimas y otras estructuras celulares.
• Cambios osmóticos: Las fluctuaciones de la presión osmótica durante la descongelación pueden dañar la membrana celular y otras estructuras. Las sustancias tóxicas pueden entrar en las células que han sido criopreservadas con DMSO o glicerol.
• Eliminación del crioprotector: Los crioprotectores se agregan a las células antes de la congelación para prevenir la formación de cristales de hielo, pero son tóxicos si no se eliminan después de la descongelación.
• Cambios en el pH: Los cambios en el pH durante la descongelación pueden causar estrés en las células. Los cambios de temperatura o la liberación de productos de desecho metabólicos pueden provocar cambios en el pH.
• Estrés mecánico: Al pipetear y centrifugar las células durante la descongelación, puede producirse estrés mecánico. Esto puede dañar las células y reducir su viabilidad.

La descongelación puede estresar a las células y afectar su viabilidad y función. Los crioprotectores y un buen protocolo de descongelación pueden minimizar este daño.

5 consejos para descongelar y reactivar células con éxito

1. Utilice un protocolo de descongelación específico para el tipo de células que se van a descongelar, como una técnica de descongelación lenta para células cancerosas y células madre.
2. Reduzca la exposición a altas temperaturas y el tiempo prolongado de descongelación para minimizar el riesgo de daño celular.
3. Durante la descongelación y la reactivación, maneja las células con cuidado para evitar daños.
4. Inspeccione las células para detectar daños y evaluar su viabilidad, y realice un seguimiento de su crecimiento antes de utilizarlas en experimentos.

Siga los protocolos y las pautas recomendados para la descongelación y reactivación de células criopreservadas.