냉동 보존 후 세포 되살리기

세포, 조직, 심지어 일부 종은 장기간 보관했다가 추후 연구를 위해 회수할 수 있습니다. 이 문서에서는 냉동 보존에서 세포를 해동하는 데 사용되는 다양한 절차를 살펴보고 세포의 생존력을 되살리고 보장하기 위한 지침을 제공합니다. 그러나 세포 배양 제공업체의 지침을 면밀히 따르는 것이 중요합니다.

주요 요점

• 세포 해동은 냉동 세포를 실온으로 서서히 데우는 냉동 보존 과정의 중요한 단계입니다.
• 암세포와 줄기세포를 해동할 때는 세포 손상 위험을 줄이기 위해 바이알을 천천히 해동하는 것이 좋습니다.
• 해동하는 동안 해동 속도, 온도, 동결 보호제에 대한 노출은 모두 세포 손상을 유발할 수 있는 요인입니다.
• 세포를 되살리려면 세포가 성장하는 데 필요한 영양소와 미네랄을 공급해야 합니다.
• 세포를 되살린 후 실험에 사용하기 전에 세포의 손상 여부와 생존력을 확인하고 성장과 증식을 모니터링해야 합니다.
• 세포를 성공적으로 해동하고 되살리려면 권장 지침과 프로토콜을 준수하고 세포를 조심스럽게 다루며 정확한 기록을 유지하는 것이 필수적입니다.

해동 프로토콜

1. 37°C 수조에서 1~2분 동안 냉동 보관함에 작은 얼음 덩어리만 남을 때까지 세포를 빠르게 해동합니다.
   • 이 시점부터 모든 절차는 무균 조건에서 수행해야 합니다.
2. 멸균된 멸균 플로우 캐비닛으로 냉동 바이알을 옮깁니다.
3. 바이알을 조심스럽게 열고 2mL 혈청 피펫을 사용하여 세포 용액의 총 부피를 측정하여 총 세포 수를 확인합니다. 그런 다음 20µL의 세포를 제거하여 전량으로 계산합니다.
4. 세포 현탁액을 8ml의 배양 배지(실온)가 들어 있는 15ml 원심분리기 튜브에 넣습니다.
5. 세포를 조심스럽게 현탁합니다.
6. 300 x g에서 3분간 원심분리하고 상층액을 버립니다.
   • 원심분리 단계를 생략하고 세포를 세포 배양 플라스크에 즉시 넣을 수 있지만 24시간 후에 배지를 교체해야 합니다.
7. 세포를 신선한 세포 배양 배지(실온 또는 인큐베이터에서 37°C로 미리 데운) 10ml에 즉시 넣어 성장 영양분을 공급하고 DSMO와 같은 동결 보호제를 희석합니다. 동결 보호제로서 DMSO는 얼음 결정의 형성을 방지하여 동결로 인한 손상으로부터 세포를 보호하지만 고농도에서는 세포에 독성을 나타낼 수 있습니다. T25 세포 배양 플라스크 2개를 세포로 채워야 합니다.
8. 세포를 인큐베이터에 넣고 다음 날 배지를 교체합니다.
9. 이 특정 세포주에 대한 지침에 따라 활성화된 세포를 계속 배양합니다.
10. 실험을 수행하기 전에 해동된 세포가 해동 스트레스로부터 회복할 수 있도록 배양 배지에서 회복할 수 있도록 합니다. 또한 현미경 관찰 또는 생존력 테스트를 통해 세포의 손상 및 생존력을 확인하고 세포의 성장을 모니터링합니다.

참고: 세포에_적합한 배양 온도와_CO2를 찾아서 설정하는 것을 잊지 마세요! 대부분의 세포는 37°C에서 배양되지만, 예를 들어 일부 곤충 세포는 더 낮은 온도가 필요합니다.

해동이 세포에 스트레스를 주는 이유는 무엇인가요?

해동 과정에서 세포는 아래에 설명된 것처럼 잠재적으로 해로운 환경 변화에 노출됩니다:

• 온도 변화: 극저온에서 따뜻한 온도로 전환하는 동안 세포가 손상될 수 있습니다. 해동 중 열충격은 세포막, 효소 및 기타 세포를 손상시킬 수 있습니다.
• 삼투압 변화: 해동 중 삼투압 변동은 세포막과 기타 구조를 손상시킬 수 있습니다. 독성 물질은 DMSO 또는 글리세롤로 냉동 보존된 세포에 들어갈 수 있습니다.
• 동결 보호제제거: 동결 전에 세포에 동결 보호제를 첨가하여 얼음 결정 형성을 방지하지만 해동 후 제거하지 않으면 독성이 있습니다.
• PH 변화: 해동 중 pH 변화는 세포에 스트레스를 줄 수 있습니다. 온도 변화 또는 대사 노폐물의 방출은 pH 변화를 일으킬 수 있습니다.
• 기계적 스트레스: 해동하는 동안 세포를 피펫팅하고 원심분리할 때 기계적 스트레스가 발생할 수 있습니다. 이로 인해 세포가 손상되고 생존력이 감소할 수 있습니다.

해동은 세포에 스트레스를 주고 세포의 생존력과 기능을 손상시킬 수 있습니다. 동결 보호제와 올바른 해동 프로토콜을 사용하면 이러한 손상을 최소화할 수 있습니다.

성공적인 세포 해동 및 부활을 위한 5가지 팁

1. 암세포와 줄기세포의 경우 천천히 해동하는 기술 등 해동하는 세포 유형에 맞는 세포 해동 프로토콜을 사용합니다.
2. 세포 손상 위험을 최소화하기 위해 고온에 대한 노출과 해동 시간을 줄이세요.
3. 해동 및 부활 과정에서 세포가 손상되지 않도록 주의하여 취급합니다.
4. 실험에 사용하기 전에 세포의 손상 여부와 생존력을 검사하고 성장을 추적합니다.

동결 보존 세포 해동 및 부활에 대한 권장 프로토콜과 가이드라인을 준수하세요.