冷冻保存后的细胞复苏

细胞、组织甚至某些物种都可以长期保存，然后再复原供进一步研究。本文介绍了冷冻保存中解冻细胞的各种程序，并为细胞复苏和确保细胞活力提供了指导。不过，重要的是要严格遵守细胞培养提供商给出的说明。

主要启示

• 解冻细胞是低温保存过程中的一个关键步骤，包括将冷冻细胞逐渐升温至室温。
• 在解冻癌细胞和干细胞时，建议缓慢解冻，因为这样可以降低细胞受损的风险。
• 在解冻过程中，解冻速度、温度和接触低温保护剂都是导致细胞受损的因素。
• 细胞复苏需要为其提供生长所需的营养和矿物质。
• 细胞复苏后，在用于实验之前，有必要检查细胞是否受损和存活，并监测细胞的生长和增殖情况。
• 为确保成功解冻和复苏细胞，必须遵守推荐的指南和规程，小心处理细胞，并保持准确的记录。

解冻方案

1. 在 37°C 水浴中快速解冻细胞 1-2 分钟，直到冷冻瓶中只剩下一小块冰。
   • 从此时开始，所有程序都必须在无菌条件下进行。
2. 将冷冻瓶转移到经过消毒的无菌流动柜中。
3. 小心打开小瓶，用 2 mL 血清学移液管测量细胞溶液的总体积，确定细胞总数。然后，取出 20 µL 细胞作为等分试样进行计数。
4. 将细胞悬浮液放入装有 8 毫升培养基（室温）的 15 毫升离心管中。
5. 小心悬浮细胞。
6. 以 300 x g 转速离心 3 分钟，弃去上清液。
   • 可省略离心步骤，立即将细胞放入细胞培养瓶中，但确保 24 小时后更换培养基。
7. 立即将细胞放入 10 毫升新鲜细胞培养基（预热至室温或 37 °C）中，以提供生长营养并稀释低温保护剂，如 DSMO。作为一种低温保护剂，二甲基亚砜可防止冰晶的形成，从而保护细胞免受冷冻造成的损伤，但高浓度二甲基亚砜可能对细胞有毒。在两个 T25 细胞培养瓶中装入细胞。
8. 将细胞放入培养箱中，第二天更换培养基。
9. 按照该特定细胞系的说明继续培养活化的细胞。
10. 在进行实验前，让解冻的细胞在培养基中恢复，以便细胞从解冻压力中恢复。同时，通过显微镜观察或进行活力测试来检查细胞的损伤和活力，并监测细胞的生长情况。

注意：不要忘记查看并设置_适合 细胞的培养温度和二氧化碳！大多数细胞的培养温度为 37 °C，但有些昆虫细胞需要更低的温度。

解冻为什么会对细胞造成压力？

解冻过程会使细胞暴露于潜在的有害环境变化中，如下所述：

• 温度变化：细胞在从低温过渡到较高温度的过程中可能会受损。解冻过程中的热冲击会损坏细胞膜、酶和其他细胞。
• 渗透压变化：解冻过程中的渗透压波动会损坏细胞膜和其他结构。有毒物质可能进入用二甲基亚砜或甘油冷冻保存的细胞。
• 去除冷冻保护剂：冷冻前会在细胞中加入冷冻保护剂，以防止冰晶形成，但如果解冻后不去除，则会产生毒性。
• pH 值的变化：解冻过程中 pH 值的变化会对细胞造成压力。温度变化或代谢废物的释放会导致 pH 值变化。
• 机械应力：解冻过程中细胞被移取和离心，会产生机械应力。这可能会损坏细胞并降低其存活率。

解冻会对细胞造成压力，损害其活力和功能。低温保护剂和良好的解冻方案可将这种损害降至最低。

成功解冻和复苏细胞的 5 个技巧

1. 针对解冻的细胞类型使用特定的细胞解冻方案，如针对癌细胞和干细胞的慢速解冻技术。
2. 减少暴露在高温下和延长解冻时间，将细胞受损的风险降至最低。
3. 在解冻和复苏过程中，要小心处理细胞，避免损伤。
4. 在实验中使用细胞前，应检查细胞是否受损和存活，并跟踪其生长情况。

在解冻和复苏低温保存的细胞时，应遵守推荐的方案和指南。